病理科医用显微镜样品制备问题解决方案：从固定到封片的质控要点

病理诊断的准确性和显微镜样品制备质量密切相关。本文聚焦病理科常见制片问题，结合《临床技术操作规范-病理学分册》要求，提供系统化解决方案。

一、固定环节：避免组织自溶与抗原流失

问题表现：细胞核模糊、免疫组化染色失败
解决方案：

固定液选择

常规活检：4%中性甲醛缓冲液（pH7.2-7.4）

免疫电镜：2.5%戊二醛+2%多聚甲醛混合液

固定时间控制

小标本（<1cm³）：6-12小时

大标本：对半切开+真空负压渗透（时间减半）

验证方法

刀片切开组织：观察切面是否呈乳白色

Trichrome染色：核质分界清晰为合格

二、切片质量：杜绝厚薄不均与刀痕

问题表现：切片皱褶、厚度超标（>4μm）
解决方案：

设备维护

磨刀角度：保持20-22°（用角度规检测）

防卷板清洁：每次切片后用乙醇擦拭

操作规范

蜡块修整：保留组织周围1.5cm石蜡

切片速度：匀速转动转轮（2-3圈/秒）

特殊组织处理

脂肪组织：冷冻切片（-20℃预冷刀架）

骨组织：脱钙后真空渗透（避免碎裂）

三、染色问题：优化对比度和特异性

问题表现：核浆对比差、背景着色深
解决方案：

H&E染色

苏木素染色：初染3分钟→分化至粉红色→返蓝5分钟

伊红染色：0.5%伊红Y水溶液浸泡1-3秒

特殊染色

Masson三色：酸性复红需**控时（30秒）

PAS染色：氧化剂浓度梯度预实验

质控指标

核质比：1:3-1:5为Z佳

切片厚度变异系数＜10

四、脱水与透明：防止气泡和脆裂

问题表现：封片后产生气泡、切片碎裂
解决方案：

梯度脱水

酒精梯度：70%→80%→95%→****（每级5分钟）

叔丁醇替代：用于线粒体保护

透明验证

二甲苯浸泡后，用滤纸测试无湿润痕迹

封片技巧

中性树胶预热至40℃（降低黏度）

盖玻片倾斜45°缓慢放下

五、污染控制：杜绝微生物滋生

问题表现：切片出现絮状沉淀物
解决方案：

预防措施

固定液添加0.01%叠氮化钠

切片刀用75%酒精擦拭消毒

应急处理

污染切片：重新脱水至70%酒精后浸泡于1%氢氧化钠24小时

严重污染样本：废弃处理并消毒器械

病理制片是**诊断的基础，需建立标准化操作流程（SOP），关键步骤设置质量控制点。建议每月进行制片优良率统计，定期参加CAP认证培训。掌握这些核心技能，您将显著提升病理诊断的准确性和可靠性。