检验科医用显微镜的观察方法介绍

检验科医用显微镜的观察方法多种多样，以适应不同样本和诊断需求。以下是一些常用的观察方法：

一、明场观察（Bright Field Observation）

明场观察是*常见的显微镜观察方式，也是一切光学显微镜的基础。其主要特点是以染色的标本为观察对象，利用透射率的变化为基础。照明光直接通过聚光镜射入样品，并透过样品进入物镜*终被观察到。多用于常规镜检、病理切片、染色标本的观察。其优点包括视野亮度高、均匀、应用范围广泛、操作简单；缺点则是对于透明的标本对比度较低。

二、暗场观察（Dark Field Observation）

暗场观察采用暗场照明，与明场观察的照明方式不同。明场观察的照明光线是直接进入物镜的，而暗场观察的照明光线是照亮被检物品而不直接进入物镜，观察到的是被检物品反射或衍射的光线。整个视场的背景是黑色的，被检样品呈现明亮的像，就像在夜空里看星星，因此也被称为超显微术。暗场观察适合观察微小粒子、细菌形态、细菌计数、透明标本等，能够看到标本的细微结构。

三、相差观察（Phase Contrast Observation）

相差观察有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，从而使原来透明的物体表现出明显的明暗差异，对比度增强，这大大便利了活体细胞的观察。该观察方式主要应用在无色透明的活体标本结构，检查鉴定活体细胞等。需要注意的是，在该模式下观察光强要高、切片不能太厚（2~10um），盖玻片、载片需符合标准，且其荧光效果不如明场物镜。

四、荧光观察（Fluorescence Observation）

荧光观察不是通过普通光源的照明观察标本，而是利用一定波长的光（通常是紫外光、蓝紫光、蓝光、绿光）激发显微镜下标本内的荧光物质，使之发射荧光。荧光显微镜的光源所起的作用不是直接照明，而是作为一种激发标本内荧光物质的能源。荧光观察的优点包括高特异性（靶向标记）、对细胞刺激小（可活体染色）、能进行多重染色（共定位）。

五、微分干涉观察（Differential Interference Contrast, DIC）

微分干涉观察是在相差的基础上演变而来的，但其物理原理与相差不同，技术设计比较复杂。DIC模式多用于观察无色透明活体标本的形态轮廓、无色荧光标本、细微结构、运动情况观测及显微操作等。其优点在于使被检物体产生三维立体感觉，观察效果更直观；无须特殊物镜，与荧光观察配合更好。但需要注意，双折射物质不能达到DIC镜检效果，而且不能应用于塑料容器培养物的观察。

六、偏光观察（Polarized Light Observation）

偏光观察是用于研究透明或不透明各向异性材料的一种显微镜观察方法。具有双折射的物质在偏光显微镜下能被看清。该方法的特点是将普通光变为偏振光进行镜检，以鉴别某一物质是单折射（各向同性）或双折射（各向异性）。因此，偏光显微镜被广泛应用在矿物和化学等领域，在生物学和植物学中也有应用。

七、霍夫曼调制相差观察（Hoffmann Modulation Contrast, HMC）

霍夫曼调制相差观察利用斜射光照射，将相位梯度转变为光强度变化，这样可以用来观察未经染色的样品和活细胞。它适用于相位物体、双折射物体、染色试样、柱状物体以及具有表面和次表面特征的物体进行高分辨率显微观察，可对细胞组织、透明液态组织、培养皿中的培养组织进行动态显微观察及科研分析。

在实际操作中，检验科医生或研究人员需要根据样本的性质和诊断需求选择合适的观察方法，并严格按照显微镜的操作规程进行操作，以确保观察结果的准确性和可靠性。